Avaliação citogenética molecular de células do líquido pleural de pacientes com derrame pleural maligno / Molecular cytogenetic evaluation of pleural fluid cells in patients with malignant pleural effusion

Introdução O diagnóstico de derrame pleural maligno (DPM) se baseia no achado de células tumorais no líquido ou no tecido pleural. Resultados falsos positivos ou falsos negativos influenciam na escolha da melhor conduta terapêutica a ser tomada, além de alterar substancialmente o prognóstico desses pacientes. A sensibilidade do exame citológico é geralmente inferior a 70%, motivo pelo qual, métodos complementares são frequentemente associados. Fatores como tipo histológico, sítio primário e grau de invasibilidade do tumor são os principais responsáveis por esta variação. Dentre os exames complementares propostos, destacam-se a dosagem de marcadores tumorais no líquido pleural (LP), as técnicas citoquímicas, imunocitoquímicas e de marcadores de proliferação celular em células do LP, a análise da ploidia de DNA por citometria de fluxo (CF) ou estática (CE) e, mais recentemente, as técnicas de citogenética e de biologia molecular, como a técnica de hibridação in situ por fluorescência (FISH) e a técnica de amplificação multiplex por sondas ligação - dependentes (MLPA) estas, capazes de detectar alterações em regiões gênicas consideradas "alvo" para o desfecho neoplásico. Objetivos 1) Padronizar as técnicas de DNA ploidia, FISH e MLPA em amostras frescas de líquido pleural; 2) Testar a eficiência diagnóstica dos métodos da DNA ploidia e da FISH no diagnóstico de derrame pleural maligno e 3) Avaliar alterações no número de cópias no gene EGFR em metástases pleurais utilizando a técnica de MLPA. Métodos Foram incluídos 200 pacientes adultos portadores de derrame pleural (DP) com indicação de toracocentese. O diagnóstico histológico foi o padrão ouro para malignidade. Características clínicas, radiológicas, histológicas e de seguimento clínico foram considerados para a exclusão de malignidade, de maneira que 130 casos foram classificados como malignos e 70 como benignos. As 200 amostras de LP foram submetidas ao exame citológico e à FISH utilizando sondas...

Introduction The diagnosis of malignant pleural effusion (MPE) is based on the finding of tumor cells in the pleural fluid or tissue. False positive or false negative results influence the choice of the best therapeutic approach to be used with these patients and substantially change their prognosis. The sensitivity of the cytology is generally lesser than 70%, for which complementary methods are often associated. Factors such as tumor histological type, staging, primary site and potential of invasiveness are responsible for this variation. Among the proposed ancillary tests, we highlight the dosage of tumor markers in pleural fluid (PF), the cytochemical and immunocytochemical techniques, including markers of cell proliferation, DNA ploidy analysis by flow cytometry (FC) or static cytometry (EC) and more recently, the cytogenetics and molecular techniques, as the fluorescence in situ hybridization (FISH) and the multiplex ligation - dependent probe amplification (MLPA), capable of detecting changes in gene regions considered "target" for the neoplastic outcome. Objectives 1) To standardize the techniques of DNA ploidy, FISH and MLPA in fresh samples of pleural fluid; 2) To test the diagnosis efficiency of DNA ploidy and FISH in the diagnosis of malignant pleural effusion and 3) To evaluate changes in the copy number of the EGFR gene by using the MLPA technique in cases of pleural metastases. Methods We included 200 adult patients with pleural effusion and clinical indication for thoracentesis. The histological diagnosis was considered the gold standard for malignancy. Clinical follow-up, radiological and histological characteristics were considered for exclusion of malignancy, which ranked de cases as 130 malignant effusions and 70 as benign ones. All cases were submitted to cytology and FISH using centromeric probes for the chromosomes 11 and 17. Analysis of DNA ploidy by FC was performed in 45 cases and the MLPA for epidermal...

Comparación entre las técnicas de citohistología compartida: convencional vs. base líquida / Shared conventional vs liquid- based cytology techniques

Describir las técnicas de citología cervicovaginal por el método convencional vs. base líquida, teniendo en cuenta la calidad de la muestra y los hallazgos morfológicos, en mujeres en edad reproductiva con vida sexual activa, tomadas en campañas de proyección social. Métodos: estudio descriptivo de corte transversal en 29 mujeres a quienes se tomaron 29 citologías, la mitad convencionales (extendidos sobre porta-objeto) y la otra mitad en base líquida. Se utilizó el método de muestra compartida (guardando la espátula y el citocepillo en el líquido fijador LucBase). Se excluyeron las embarazadas, las que estuvieron menstruando o que hubieran recibido radio o quimioterapia. Resultados: La variable sobre calidad de la muestra mostró que de las 29 convencionales 16 tenían material endocervical o de la zona de transformación, mientras en base líquida solo una tuvo endocérvix. En cuanto al registro de lectura, de 29 convencionales, tres fueron ASCUS; de catorce en base líquida, doce fueron inadecuadas y dos rechazadas. En lo referente al tiempo de realización de las técnicas, se halló una diferencia de siete minutos para la base líquida en relación con la convencional. Conclusiones: al comparar la muestra compartida para las dos técnicas, se encontró mayor celularidad y presencia de endo-cérvix en la convencional. Las preparaciones en base líquida mostraron fondo sucio constituido por células inflamatorias, moco y detritus celulares, no cumpliendo con una de las características de mejoramiento de la técnica. La muestra compartida haciendo primero el frotis convencional, reduce o acaba con el material que se preserva para la base líquida. Los nuevos estudios los enfocamos hacia el uso de nuevas tecnologías para base líquida como ThinPrep y SurePath.

To describe cervix cytology techniques, that is, the conventional method vs liquid- based preparations, taken during social projection campaigns, in terms of sample quality and morphologic findings, in sexually active women of reproductive age. Methods: a cross-sectional descriptive study in 29 women in which cytology was performed, half of them by the conventional method (smear on a slide) and the other half by a liquid-based preparation. The shared sample method was used (keeping the spatula and cytology brush in LucBase solution). Women who were pregnant, menstruating or had received chemotherapy or radiotherapy were excluded. Results: The variable on quality of the sample showed that of the 29 conventional samples, 16 had endocervical or transformation zone material, while only one on liquid- based preparation had endocervix. As to the reading records, out of 29 conventional samples, 3 were interpreted as ASCUS; out of 14 liquid-based, 12 were inadequate and two were rejected. A 7 minute difference in performing the liquid-based technique was found compared to the conventional technique. Conclusions: an increased cellularity and endocervix pre-sence was found in the conventional technique when comparing the shared sample for the two techniques. Liquid-based preparations showed a dirty background consisting of inflammation, mucus and cellular detritus, not complying with one of the features of technique improvement. When performing the conventional smear first, the material preserved for the liquid- based technique is reduced or fade in the shared sample. Our new studies are focused on the use of new technologies for liquid- based preparations such as ThinPrep and SurePath.

Perfil citológico dos líquidos amniótico e alantoidiano nos terços inicial, médio e final da gestação na vaca / Cytology of amniotic and allantoic fluids in the cow at the first, second, and third trimester of pregnancy

The cytology of extraembrionic fluids in cows in the first, second, and third trimester of pregnancy was evaluated. For each trimester, 10 pregnant uteri, collected in the slaughterhouse were used. A volume of 20mL of amniotic and allantoic fluids was collected, and centrifuged at 200g for 10 minutes. The sediment was taken and processed on a slide for cytology examination after staining. The results showed that the total cells number of the amniotic fluid increased during gestation, with the panoptic staining method being efficient to evaluate the amniotic fluid cytology in crossbreed Holstein x Zebu cows.

Sonohisterografía: citología endometrial por lavado aspirativo de cavidad / Sonohysterography: endometrial cytology by lavage-aspiration of cavity

Se presenta la introducción del estudio de la citología endometrial como complemento a la Sonohisterografía. La recuperación del líquido endocavitorio por aspiración, resulta un excelente complemento al procedimiento pues permite un adecuado diagnóstico en un 70,8 por ciento de las pacientes.

Exame do líquido pleural nos laboratórios do estado de Santa Catarina / Pleural liquid examination in the state of Santa Catarina

O objetivo deste trabalho foi realizar um levantamento, em relaçäo ao perfil metodológico do exame do líquido pleural no Estado de Santa Catarina, já que existem numerosos métodos para o estudo do líquido pleural. Para avaliar a metodologia aplicada nos laboratórios do Estado, foram enviados questionários para os laboratórios das maiores cidades, quanto as análises citológicas, bioquímicas e microbiológicas da amostra de líquido pleural näo há uma homogeneidade nos protocolos entre os laboratórios para a maioria das análises. Isso se deve provavelmente a uma adaptaçäo da rotina de acordo com as condiçöes do serviço e do paciente atendido

Análise citológica do líquido pleural no Hospital Universitário de Florianópolis / Cytologic analysis of the pleural fluid at the University Hospital of Florianópolis

A pleura consiste de uma cavidade que separa os pulmões e a porção interior da parede torácica, é revestida por uma membrana serosa com uma divisão visceral e outra parietal. Separando estas membranas, está o líquido pleural, o qual serve como um lubrificante para o livre movimento dos pulmões para as trocas de volume que apresentam durante a respiração. Este líquido é um ultrafiltrado do plasma, incolor e relativamente acelular em condições normais. Nesta pesquisa em particular, tivemos como objetivo, avaliar apenas os exames citológicos e comparar estes resultados com a revisão bibliográfica. O trabalho desenvolvido, compreendeu o período de março de 1997 a fevereiro de 1999, no total de 141 exames verificados. Observamos um predomínio de análises do líquido pleural em pacientes do sexo masculino (41%), seguido de 36% de pacientes do sexo feminino. Quanto ao tipo celular (citologia diferencial), considerando neutrófilos, mononucleares, células mesoteliais e eosinófilos, foi na faixa de 1 a 10% do total dos líquidos que as mesmas apareceram em números superiores ao relatado na literatura (neutrófilos/40, mononucleares/39, células mesoteliais/50, eosinófilos/16, célula/número de exames respectivamente). Ao verificarmos a citologia global, as hemácias/mm³, apresentaram o seu maior índice entre 1.001-10.001 hem/mm³ (46%), considerando-se valores normais. Acima dos valores normais citados na literatura, temos as células nucleadas/mm³, entre 1.001-10.001 células nucleadas/mm³ (38%). Para dados conclusivos, deveríamos continuar o acompanhamento das análises citológicas.

Anti-implantation effect of a bone-marrow cytokine-BIM.

Successful implantation of blastocyst is dependent upon a cytokine induced localized immunosuppression at uterus. BIM, a bone marrow secreted bio-immunomodulator (BIM) has been observed to have positive immunomodulatory activity in immunosuppressed cases. As pregnancy is associated with immunosuppression upregulation of the suppressed immune system by injection of BIM (conc. 0.08 microg/g b.wt once in rats b.wt. <150 gm or 0.2 microg/g b.wt thrice in rats weighing > 160 gm) is believed to prevent implantation. The anti-implantation action of BIM is probably mediated via mononuclear cells at site of uterus, the effect is reversible and a single dose did not affect the estrous cycle. Multiple dose of BIM however, produce prolonged diestrous and this is probably an autonomic phenomena.

Utilidade da análise de DNA por citometria de fluxo em fluidos da cavidade corporal em comparaçäo com a citologia convencional / Utility of DNA flow cytometric analysis of body cavity fluids in comparison with conventional cytology

A potencial utilidade da análise por citometria de fluxo em rotina de citologia diagnóstica para efusöes foi avaliada com 104 amostras de fluidos da cavidade corporal. A citologia convencional mostrou näo positividade (0/33) para efusöes de pacientes com doenças näo malignas e 45 porcento de positividade (38/71) para efusöes de pacientes com doenças malignas. Inversamente, a citometria de fluxo mostrou näo positividade (0/33) de pacientes com doenças näo malignas e 18 porcento de positividade (padräo aneuplóide) (13/71) com doenças malignas. Em 13 casos examinados, 8 casos (62 porcento) mostraram idêntico padräo de ploidia de DNA entre o local da efusäo e o tumor primário. A citometria de fluxo mostrou positividade em 4 amostras citologicamente negativas (3 linfomas malignos e 1 carcinoma de células claras). Nos casos com linfomas malignos, a citologia convencional mostrou 40 porcento de positividade (4/10) e a citometria de fluxo 60 porcento (6/10) de positividade. Estes resultados indicam que a análise de DNA de células em efusöes malignas näo tem valor diagnóstico como um teste de rotina, mas pode ter nos casos de linfoma maligno

Determinación de la ploidia del ADN por citofotometría en líquidos pleural y abdominal y su correlación con diagnóstico citológico convencional (Estudio de 40 casos) / (DNA ploidym image cytometry and cytology of pleural and abdominal fluids)

Se realiza un análisis prospectivo de 40 líquidos corporales, 22 abdominales y 18 pleurales, recibidos en un lapso de 5 meses. Se estableció una correlación entre el exámen citológico de rutina y la ploidia del ADN, determinada por citofotometría. De los 25 casos clasificados citológicamente como benignos, 21 fueron diploides y 4 aneuploides; sólo uno de estos últimos al revaluarse la citología fue considerado como no neoplásico, los otros 3 fueron falsos negativos. De los 15 casos considerados citológicamente como malignos, 3 fueron diploides y sólo uno de estos fue un falso positivo por citología. Los otros 2 fueron: 1 linfoma y 1 mesotelioma, mismos que con gran frecuencia pueden ser diploides. La sensibilidad y la especificidad por ambos métodos fueron de 77 y 95 por ciento y de 94 y 95 por ciento respectivamente. De lo anterior concluimos que la Cl nos puede ayudar a detectar aneuploidia en algunos casos diagnosticados en citología como falsos negativos (3 de nuestros casos); pero en algunos casos las células malignas pueden ser diploides (20 por ciento de nuestros casos) y entonces la Cl no nos permitiría detectarlos como malignos y es aquí donde la citología de rutina es indispensable

In vitro adhesiveness of Gardnerella vaginalis strains in relation to the occurrence of clue cells in vaginal discharge.

G. vaginalis was isolated from 52.4 per cent patients with non-specific vaginitis. The haemagglutinating activity of G. vaginalis was strongest with human 'O' red cells and weaker reactions were observed with sheep and chick erythrocytes. Haemagglutinating activity of G. vaginalis with human 'O' cells (1:16 titre) could be correlated with clue cells in vaginal discharge in 73 per cent patients while in lower titres, this correlation was not observed.

Dx de laboratorio de estreptococos (Lancefield C y G) / Laboratory diagnosis of streptococcus (Lancefield C and G)

La presencia de microrganismos en un líquido corporal normalmente estéril como la sangre, puede representar la evidencia de una infección activa que tiene el riesgo de propagarse a otros órganos o tejidos de la economía; por ésto, el laboratorio de microbiología clínica cumple una función muy importante en el diagnóstico, al aislar a los agentes causales mediante hemocultivos